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食品中金黄色葡萄球菌的检验方法

日期2018/11/25 15:09:47 点击次数 666 发布单位天义生物谷  录入李清

一设备和材料


1冰箱0桫4档


2恒温培养箱36士1档


3显微镜10*100*


4均质器或灭菌乳钵


5架盘药物天平0g500g精?#20998;?.5g


6灭菌试管10mm*100mm16mm*160mm


7灭菌吸管1mL具0.01mL刻度10mL具0.1mL刻度


8灭菌锥形瓶500mL100mL


9灭菌培养皿直径90mm


10注射器0.5mL


11灭菌L型涂?#21450;?/span>


12灭菌刀剪子镊子等


二培养基和试剂


1胰?#20197;?#22823;?#35895;?#27748;按GB/T4789.28一2003中4.59规定


2 7.5氯化钠肉汤按GB/T4789.28一2003中4.61规定


3血琼脂平板按GB/T4789.28一2003中4.6规定


4 Baird一Parker琼脂平板按GB/T4789.28一2003中4.60规定


5肉浸液肉汤按GB/T4789.28一2003中4.1规定


6 0.85灭菌生理盐水4.7兔血浆按GB/T4789.28一2003中4.63规定


三操作步骤


1增菌培养法


1检样处理按无菌操作取检样25g(ml)加入225mL灭菌生理盐水固体样品研磨或置均质器中制成混悬液


2增菌及分离培养?#20309;?#21462;5ml上述混悬液接种于7.5%氯化钠肉汤或胰?#39029;?#22823;?#35895;?#27748;50mL培养基内36士1培养24h转种血平板和Baird一Parker平板36士1培养24h挑取血平板上金黄色有时为白色菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验


3形态本菌为革兰氏阳性球菌排列呈葡萄球状无芽胞无荚膜致病性葡萄球菌菌体较小直径约为0.5um1um


4在肉汤中呈混浊生长在胰酩膝大?#35895;?#27748;内有时液体澄清菌量多时呈混浊生长血平板上菌落呈金黄色有时也为白色大而?#40644;?#22278;形不?#35813;?#34920;面光滑周围有溶血圈在Baird一Parker平板上为圆形光滑凸起湿润直径为2mm3mm颜色呈灰色?#33014;?#33394;边缘为淡色周围为一混浊带在其外层有一?#35813;?#22280;用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落但无混浊带及?#35813;?#22270;长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色?#31995;?#20123;外观可能?#26893;?#24182;干燥


5血浆凝固酶试验?#20309;?#21462;14新鲜兔血浆0.5mL放入小试管中再加人培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤堵养物0.5mL振荡摇匀置36士1温箱或水浴内每半小时观察一次观察6h,如?#27663;?#20957;固即将试管倾斜或倒置时?#27663;?#20957;块者被认为阳性结果同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照


2直接计数方法6.2.1吸取上述110混悬液进行10倍递次稀释根据样品污染情况选择不同浓度的稀释液1mL分别加人三块Baird一Parker平板每个平板接种量分别为0.3mL0.3mL0.4mL然后用灭菌L棒涂布整个平板如水分多不易吸收可将平板放在36士1 lh等水分蒸发后反转平皿置36士1培养


在三个平板?#31995;?#25968;周围有混浊带的黑色菌落并从中任选五个菌落分别接种血平板36士1 24h培养后进行染色镜检血浆凝固酶试验步骤同增菌培养法


3菌落计数将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加乘以血浆凝固酶阳性数除以5再乘以稀释倍数?#32431;?#27714;出每克样品中金黄色葡萄球菌数   

 
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