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肺炎支原体的培养方法

日期2018/11/25 14:55:48 点击?#38382;?nbsp;641 发布单位天义生物谷  录入李清

肺炎支原体M.Pneumonia是?#27515;?#25903;原体肺炎的病原体支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主有时并发支气管肺炎称为原发性非典型性肺炎主要经飞沫传染潜伏期23周发病率以青少年最高临床症状较轻甚至根本无症状若有也只是头痛咽痛发热?#20154;?#31561;一般的呼吸道症状但也有个别死亡报道一年四季均可发生但多在秋冬时节


症状


支原体肺炎突出表现为阵发性刺激性?#20154;ԡ?#32954;炎支原体感染人体后经过2~3周的潜伏期继而出现临床表现约1/3的病例也可无症状它起病缓慢发病初期有咽痛头痛发热乏力肌肉酸痛食欲减退恶心呕吐等症状发热一般为中等热度2~3天后出现明显的呼吸道症状突出表现为阵发性刺激性?#20154;ԣ?#20197;夜间为重咳少量黏痰或黏液脓性痰有时痰中带血也可有呼吸困难胸痛发热可?#20013;?~3周体温正常后仍可遗有?#20154;ԡ?/span>


支原体肺炎患者虽然自感症状较重但胸部体检一般无明显异常体征鼻部轻度鼻塞流涕咽中度充血耳鼓膜常有充血约15%有鼓膜炎颈淋巴结可?#29366;?#32422;10%~15%病例发生少量胸腔积液除呼吸系统的表现外支原体肺炎可伴发多系统多器官损害皮肤损害可表现为斑丘疹结节性红斑水疱疹等胃肠道系统可见呕吐腹泻和肝功损害血液系统损害较常见溶血?#20113;?#34880;中枢神经系统损害可见多发性神经根炎脑膜脑炎及小脑损伤等?#38590;?#31649;系统病变偶有心肌炎及心包炎


支原体肺炎患者胸部X线检查变化很大病变可很轻微也可很广泛体征轻微而胸片阴影显著是本病特征之一血常规检查白细胞高低不一大多正常有时偏高支原体肺炎的临床表现和胸部X线检查并不具特征性单凭临床表现和胸部X线检查无法做出诊断若要明确诊断需要进行病原体的检测目前国内支原体肺炎的诊断主要依靠血清学检测


分离培养方法


1支原体固体培养基接种法


转动拭子将标本液体尽量挤出用无菌滴管吸1-2滴接种在平皿?#32454;?#22909;用L棒涂抹或倾斜转动平皿使标本均匀分布置37C孵育


2支原体半固体培养基接种法


混种法在制备半固体培养基?#20445;?#22521;养基加热溶化温度降至50C?#20445;?#28155;加动物血清酵母浸液及青霉素后混匀待冷却至37-40C?#20445;?#29992;无菌滴管吸取标本0.5-1ml加入培养基中充分混匀凝固后置37C孵育


3穿刺接种法方法同细菌接种法


结果观察


绝大多数支原体为兼性厌氧少数在含10% CO2和相对湿度80-90%的大气环境中生长良好支原体生长缓慢多数于3-4d长出菌落少数于1-2w方长出典型菌落在平皿固体培养基上生长的菌落呈"油煎蛋"状边缘不整齐


常用培养基及配方


一心汤复合培养基配方


牛心汤1000ml


蛋白胨10g


氯化钠5ml


酵母提取液10ml


无菌马血清200ml


1.25%醋酸铊溶液20ml


青霉素200IU/ml


二糖酵解培养基肺炎支原体培养基


1配方一


基础培养基 70ml


马或牛血清 20ml


25%酵母浸液 10ml


0.4%酚红 0.5ml


1%醋酸铊 2.5ml


青霉素10000IU/ml 5.0ml


调pH 7.8


2配方二


PPLO 21g商品化买


酵母粉 6gOXIDE


马血清 200ml可用小牛血清代替


L-半胱氨酸 0.3g


葡萄糖 10g


1%酚红 4ml


AMP 若干0.1-0.2g醋酸铊有毒性可?#24739;?/span>


调pH 7.5-7.6

 
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