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消除组织培养污染的方法步骤

日期2018/2/26 17:48:32 点击?#38382;?nbsp;1692 发布单位天义生物谷  录入李清

    摘要高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性因而做剂量?#20174;?#23454;验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要

    当重要的组织培养物质污染时研究者可能试图消除或控制污染首先确定污染物是细菌真菌支原体或酵母把污染细胞与其它细胞系隔离开用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台检查HEPA过滤器

    下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤

    在无抗生素的培养基中消化计数和稀释细胞稀释到常规细胞传代的浓度

    分散细胞悬液到多孔培养板中或几个小培养瓶中在一个浓度梯度范围内把选择抗生素加入到每一个孔中例如两性霉素B推荐下列浓度0.250.501.02.04.0,8.0 mg/ml

    每天观测细胞毒性指标如脱落出现空泡汇合度下降和变圆

    确定抗生素毒性水平后使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代

    在无抗生素的培养基中培养细胞一代

    重复步骤4

    在无抗生素的培养基中培养4-6代确定污染是否以已被消除

 
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